绵羊试剂盒制备方法和洗涤方法

　　使用绵羊ELISA试剂盒进行实验，我们必须掌握两种方法，制备方法以及洗涤方法，那么它们的步骤是怎么样的呢？

　　绵羊ELISA试剂盒制备方法

　　1)抗原表位的计算机筛选；

　　2)抗原的制备；

　　)血清的收集；

　　4)间接ELISA方法的建立；

　　5)间接ELISA方法的敏感性和特异性验证；

　　6)试剂盒的稳定性验证；

　　7)对屠宰场进行临床检测。该方法简单、快速、灵敏度高、特异性强、稳定性合格、重复性好。应用本发明制得的试剂盒能有效检出感染猪的戊型肝炎病毒，适用于大批量病发样本的检测，可用于猪戊肝的快速诊断，并预防、控制猪戊肝病毒的流行和阻断戊肝病毒由猪向人传播。

　　绵羊ELISA试剂盒洗涤方法

　　洗涤在ELISA进程中虽不是一个反应步骤，但却也决定着实验的成败。洗涤的方式除某些ELISA仪器配有特殊的自动洗涤仪外，手工操作有浸泡式和流水冲洗式两种，过程以下：

　　（1）浸泡式

　　a.吸干或甩干孔内反应液；b.用洗涤液过洗一遍（将洗涤液注满板孔后，即甩去）；c.浸泡，行将洗涤液注满板孔，放置分钟，间歇摇动，浸泡时间不可随意缩短；d.吸干孔内液体。吸干应完全，可用水泵或真空泵抽吸，也可甩去液体后在清洁毛巾或吸水纸上拍干；e.重复操作c和d，洗涤 -4次（或按说明规定）。在间接法中如本底较高，可增加洗涤次数或延长浸泡时间。

　　微量滴定板多采取浸泡式洗涤法。洗涤液多为含非离子型洗涤剂的中性缓冲液。聚苯乙烯载体与蛋白质的结合是疏水性的，非离子型洗涤剂既含疏水基团，也含亲水基团，其疏水基团与蛋白质的疏水基团借疏水键结合，从而削弱蛋白质与固相载体的结合，并借助于亲水基团和水分子的结合作用，使蛋白质回复到水溶液状态，从而脱离固相载体。洗涤液中的非离子型洗涤剂一般是吐温20，其浓度可在0.05%-0.2%之间，高于0.2%时，可使包被在固相上的抗原或抗体解吸附而减低实验的灵敏度。

　　（2）流水冲洗式

　　流水冲洗法最初用于小珠载体的洗涤，洗涤液仅为蒸馏水乃至可用自来水。洗涤时附接一特殊装置，使小珠在流水冲击下不断地滚动淋洗，延续冲洗2分钟后，吸干液体，再用蒸馏水浸泡2分钟，吸干便可。浸泡式犹如盆浴，流水冲洗式则好比淋浴，其洗涤效果更为完全，且也简便、快速。已有实验表明，流水冲洗式一样也适用于微量滴定板的洗涤。洗涤时设法加大水流量或加大水压，让水流冲击板孔表面，洗涤效果更佳。